酸奶中黄曲霉毒素应用案例
样品提取:
Ÿ 称取4g酸奶样品于50mL离心管中,加入10mL提取液(纯乙腈)混匀
Ÿ 涡旋6min,放入离心机(8000r/min离心10min),取上清液作为样品提取液
样品净化:
Ÿ 步骤1:向试管中加入5mL样品提取液
Ÿ 步骤2:将净化柱橡胶头从试管顶端插入试管中,并向下压净化柱至试管底端
Ÿ 步骤3:将净化柱上部净化后的样品提取液倒出至样品瓶或EP管中
Ÿ 步骤4:取2mL净化提取液,氮吹至干,用1mL或0.5mL初始流动相复溶,过微孔滤膜,上机分析
HPLC检测条件:
Ÿ 流动相:A相,水;B相,乙腈-甲醇(50:50,v:v)
Ÿ 等梯度洗脱条件:A,68%;B,32%
Ÿ 色谱柱:C18柱(柱长150mm,柱内径4.6mm,填料粒径5μm)
Ÿ 流速:1.0mL/min
Ÿ 柱温:40℃
Ÿ 进样量:50μL
Ÿ 荧光检测:激发波长:360nm;发射波长:440nm
实验结果:
黄曲霉毒素标液相色谱图
(AFM1为5ng/mL)
酸奶阴性样品与阴性加标样品对比图
(AFM1加标浓度为10ng/g)
酸奶样品最低检出限、加标回收率与重复性
(AFM1加标浓度为10ng/g)
黄曲霉毒素 | 最低检出限(ng/g) | 回收率(%) | 重复性RSD(n=3,%) |
AFM1 | 0.04 | 118.3 | 2.14 |