影响色谱柱分离度的因素是固定相的类型。性质(粒度。粒径分布等。).填充状态。柱长。流动相的类型和流速以及用于测量柱效的物质的性质。具体如下:

(1)色谱长度和填料性质。色谱柱越长，成分之间的分析越好，但色谱柱越长，压降越大，输入压力有限。色谱柱过长会增加进出口压力比，反而会影响色谱峰分离；

(2)色谱柱填料的粒度也是主要因素。粒子越细，由于表面积增加，分辨率越好，但颗粒细度会增加柱压降，也会产生反作用；

(3)柱温对液相色谱仪的分析也有很大的影响，因为气体在液体中的溶解度或固体表面的吸附程度随着温度的增加而降低。

(4)在气液色谱分析中，当超过一定温度时，静态液体通常会从色谱柱中挥发，所以在选择柱温时要考虑样品的沸点。一般来说，N2.Ar等分子量大的气体的优点是扩散效果小，缺点是柱内压降大流速慢，即分析周期长；

(5)载气流速的影响。介质在固定相上的滞留时间主要取决于介质本身的特性(挥发性、极性等。)和载气流速。因此，流速直接影响分离度；

(6)进样时间和进样量的影响。进样时间应尽可能短。原则上，瞬时进样会增加分离度。进样量应尽可能小，但检测器应能识别。因此，通过增加柱长、减少进样量、降低载气流速、降低色谱柱温度、提高汽化室温度和减少系统死体积，可以实现提高色谱柱分离度。